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RNA荧光(RiboGreen)定量检测试剂盒产品说明书
点击次数:358 发布日期:2018-12-14  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
 RNA荧光(RiboGreen)定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
 
主要用途
 
 RNA荧光(RiboGreen)定量检测试剂是一种旨在通过使用RiboGreen荧光染料与样品中RNA的高度结合而产生荧光信号来精确定量样品中RNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种分子生物学实验,例如体外转录RNA、Northern Bolt、S1核酸酶检测、RNA酶保护检测、cDNA库制备、逆转录PCR和差异显示PCR中RNA含量分析。产品严格无菌,即到即用,性能稳定,高度敏感。
 
技术背景
 
作为RNA染色剂之一的RiboGreen荧光染料与样品中RNA,包括rRNA、mRNA等结合,产生荧光信号。RiboGreen技术可以检测到低达1纳克RNA的变化。RNA的微量增加引起荧光信号强度(Intensity)或相对荧光单位(RFU)的显著增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计,重复性标准差异(Standard Deviation)低,不受样品化学成分的干扰。
 
产品内容
 
染色液(Reagent A)     15微升
稀释液(Reagent B)      5毫升
标准液(Reagent C)         200微升
产品说明书                          1份
 
保存方式
 
保存染色液(Reagent A)和标准液(Reagent C)在-20℃冰箱里,避免反复冻融;其余的保存在4℃冰箱里,染色液(Reagent A)避免光照,有效保证6月
 
用户自备
 
1.5毫升离心管:用于样品操作的容器
200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板:用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪:用于荧光定量分析
 
实验步骤
 
  • 测定准备
 
  • 准备好待测样品,置于冰槽里
  • 设定好荧光分光光度仪:激发波长485±10nm,散发波长530±12.5nm,并置零
  • 实验开始前,将-20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出500微升稀释液(Reagent B)到新的1.5毫升离心管,加入2.5微升染色液(Reagent A),混匀后,用锡纸包裹,标记为染色工作液(5次测定量),放在暗室里。然后进行下列操作。
 
  • 构建标准曲线
 
  • 准备好5个1.5毫升离心管,标记为1至5号管
  • 分别加入100微升稀释液(Reagent B)到每个离心管
  • 移取100微升标准液(Reagent C)到1号管,混匀
  • 小心移取100微升1号管稀释的标准液(Reagent C)到2号管,混匀
  • 小心移取100微升2号管稀释的标准液(Reagent C)到3号管,混匀
  • 小心移取100微升3号管稀释的标准液(Reagent C)到4号管,混匀
  • 将1至5号管放进冰槽里备用;标准管含量见下表
 
管号 稀释液(Reagent B) 标准液(Reagent C) 标准RNA总量
1 100微升 100微升 1微克/毫升
2 100微升 100微升1号管 0.5微克/毫升
3 100微升 100微升2号管 0.25微克/毫升
4 100微升 100微升3号管 0.125微克/毫升
5 100微升 空对照 0
 
  • 移取100微升含有染色液(Reagent A)稀释液(Reagent B)染色工作液到新的比色皿
  • 加入100微升上述配制的标准液
  • 室温下,孵育5分钟,避免光照
  • 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
  • 重复实验步骤8至11四次
  • 绘制标准曲线:纵座标(Y轴)为相对荧光单位(RLU);横坐标(X轴)为DNA含量(微克/毫升)
 
  • 样品检测
 
  • 移取100微升含有染色液(Reagent A)稀释液(Reagent B)染色工作液到新的比色皿
  • 加入100微升待测样品
  • 室温下,孵育5分钟,避免光照
  • 即刻放进荧光分光光度仪测读:获得相对荧光单位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
  • 根据标准曲线获得样品对应RNA含量(微克/毫升)
 
注意事项
 
  • 本产品为25次操作,包括标准曲线测定
  • 整个操作须带手套,建议使用滤芯枪头,并格外小心,防止降解RNA
  • 建议所有的操作用品属于RNA专用
  • 使用新鲜配制的染色工作液,务必不要超过2小时,且注意避光
  • 孵育时,避免光照
  • 系统检测,标准曲线测定1次即可;如果仪器更换,则需要重新测定1次
  • 如果荧光读数过高,可以相应稀释样品量
  • 盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖不会干扰检测
  • 如果样品中含有DNA,建议使用5单位DNA酶,37℃孵育90分钟预处理
  • 标准曲线参考如下:
 
  • 本公司提供系列RNA检测试剂产品
 
质量标准
 
  • 本产品经鉴定性能稳定
  • 本产品经鉴定高度敏感
来源:上海一基实业有限公司
联系电话:021-61119791
E-mail:2851717098@qq.com

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