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徕卡新品SP8 DIVE多光子显微镜助力快速多色活体成像
点击次数:2797 公布日期:2019-4-18  来源:本站 本站原创,转载请注明出处

随着生命科学的不断深入开展,科学家们越来越希望能观察到生物活体内细胞组织的生理进程及蛋白分子之间的相互联系。近年来,新荧光蛋白的开拓、转基因技术和新标志技术的开展,使科学家们能够得到带有多种荧光的模型动物用于生命科学包括疾病的研究。

 

多光子显微镜越来越多的用于活体动物荧光成像,但是,传统多光子显微镜使用滤片离别发射光来检测,差别染料通过多光子激发后发生的串色现象不容易排除,所以只能使用顺次扫描来进行多色成像,多个序列成像将成像时间增加了数倍,并且多光子激光器在转换波长时比较慢(通常需要约1秒),这大大减慢了多色成像的速度,导致生命进程的错失和荧光淬灭的增加。所以,使用传统多光子跟踪活体内多组分变化是非常困苦或者说是基本不可能的!



 

徕卡显微系统2018年新产品——SP8 DIVE光谱型的多光子显微镜胜利解决了这个难题:多通道自由调节检测范围,实现同一波长激发两种及以上染料,成为高分辨率快速深度活体成像的理想选择!

 

 

视频1.活体小鼠大脑毛细血管内的血细胞流动和相应神经细胞的分布。
Green: dye488, Red:tdTomato,成像速度2048×2048@3.8 fps。
完整视频500幅图像仅用2分钟13秒!

 

 

视频2. 将图像调整为1024×400即可实现18.5 fps更快的成像速度

 

上面视频用900 nm红外光同时激发tdTomato  和dye488,通太过别调节检测范围(图3)幸免二者的串色,同时分别最大程度地收集有效光子。完全幸免差别波长之间依次切换成像,大大节省时间。配合Leica共聚焦使用的 8k或12k Hz高速扫描,能够抓拍到血管内血细胞的流动。这在传统滤片型多光子共聚焦显微镜是完全不可能实现的。

 

 

图1. 4Tune光谱式检测器让您拖动鼠标即可自由选择检测光谱

 

 

视频3. Thy1-eYFP 小鼠脑皮层血细胞三次谐波成像
绿色为神经元表示的YFP荧光,红色为血细胞的三次谐波信号。
1300 nm同时激发得到YFP和THG信号,256x256@70 fps

 

此外,德国波恩科学家使用SP8 DIVE还拍摄到了 Thy1-eYFP 小鼠脑皮层血细胞的三次谐波成像(THG,视频3)。同样是使用了检测光谱自由可调的优点,精确地得到了荧光和THG信号的组合成像。

 

所以,SP8 DIVE的光谱自由可调在多色活体快速成像方面具备无可比拟的优势。轻而易举实现对活体动物体内深部快速生理进程的成像,如钙离子等活性物质释放、血管和组织内物质代谢、神经冲动的发生和流传等等,是观察活体动物深部结构及快速生理进程的理想选择。
 

关于徕卡显微系统Leica Microsystems

徕卡显微系统是环球显微科技与分析科学仪器之领袖厂商之一,总部位于德国维兹拉(Wetzlar, Germany)。主要提供显微结构与纳米结构分析领域的研究级显微镜等专业科学仪器。自公司十九世纪成立以来,徕卡以其对光学成像的极致追求和不断进取的创新精神始终得到业界普遍认可。徕卡在复合显微镜、体视显微镜、数码显微系统、激光共聚焦扫描显微系统、电子显微镜样品制备和医疗手术显微技术等多个显微光学领域处于环球领先身分。

 

自创立至今,徕卡的光学足迹已遍及环球100多个国家。当前,徕卡在欧洲、亚洲与北美有6大产品研发与生产基地,在20多个国家设有销售或服务撑腰中心,以及遍布环球的经销商服务网络。

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