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肿瘤学研究之评价细胞迁移的高通量成像检测法
点击次数:2262 公布日期:2013-5-6  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

肿瘤学研究之——评价细胞迁移的高通量成像检测法

    在研究诸如转移性肿瘤、炎症和慢性疾病中,观察细胞的迁移是一个很重要的方法。检测细胞迁移的方法有助于更清楚的了解疾病的机制,对付药物和治疗效果的评判也是极其重要的。我们介绍一种新的方法,即结合MD ImageXpress Micro高内涵系统和Oris 细胞迁移检测板,用以检测细胞的迁移。

    Oris细胞迁移检测板是一个96孔板形式的耗材,硅胶块能够封闭住的中心地区,使中间地区无法铺种细胞。当硅胶块移除后,周围细胞迁移进入中心地区,此时能够使用活细胞试剂,如Calcein-AM进行荧光标志,或将细胞固定后标志细胞核进行检测分析。

    使用ImageXpress Micro高内涵系统能够进行整孔成像,因此能够高速高效的猎取孔内迁移地区的图像。

介绍

    Oris 细胞迁移板使用硅胶块封闭96孔板每个孔的中心地区,使中心地区无法铺种细胞,从而在孔中心获得一个直径2mm的环形检测地区,当细胞发生迁移,周围的细胞会迁移进入中心监测地区。Oris细胞迁移板提供多种细胞外基质,如I型胶原和纤维粘连蛋白,铺涂于96孔板,用于细胞迁移实验。我们采纳了HT-1080MDA-MB-231细胞在铺有三种不消细胞外基质的Oris板上研究差别水平MEK抑制剂U0126对细胞迁移的作用。该实验中,我们能够看到ImageXpress Micro高内涵系统能够快速方便的获得每个孔内包含监测地区的图像。软件系统能够主动计算孔中心监测地区迁移细胞所占据的面积,从而快速获得实验结果。

原料

Oris细胞迁移检测板

HT-1080纤维肉瘤细胞

MDA-MB-231乳腺癌细胞

HT-1080细胞培养液:含有10%高温灭火FBSEMEM,抗生素,碳酸氢钠,丙酮酸钠。

PBS

8%戊二醛

Triton X-100

DMSO

MEK抑制剂U0126

PI

ImageXpress Micro高内涵系统

 

实验方法

1. HT-1080MDA-MB-231细胞以30000细胞/孔的密度种植于三种细胞外基质包被的Oris细胞迁移板中(图1)。在37度下培养6小时,使细胞牢固贴壁。

2. 6小时后,除比拟孔外,移除Oris板上的封闭硅胶(1,5,9列)

3. 37度下,孔内加入0.1% DMSOMEK抑制剂U0126,孵育16小时,使细胞发生自由迁移。

4. 0.25%戊二醛固定细胞,以0.1%Triton X-100破膜。

5. PBS冲洗,1ug/mL PI室温下孵育30分钟。无需二次冲洗。

6. 样品放入ImageXpress Micro高内涵系统,在2X物镜下和标准的Cy3滤色片组进行细胞成像。在2X镜下,ImageXpress Micro系统能够进行整孔成像,能够一次获得整个孔内细胞地区和检测地区的图像。

1. 包被有三种差别基质的Oris细胞迁移板。A-D行种以HT-1080细胞,E-H行种以MDA-MB-231细胞。

结果

    ImageXpress Micro系统获得孔内图像,采纳优化的分析系统辨认荧光细胞并在特定地区(ROI)辨认背景。通过对中心检测地区内细胞的识别,能够分析出迁移进入该地区的细胞的数量。 ImageXpress Micro系统在5分钟内主动获得全部图像,图像主动保留入MDCStor数据库内,当需要时,能够进行一切图像的主动分析。

2. ImageXpress Micro系统2x镜头下获得的孔内图像。右图显示环状检测地区。

    实验结果显示,HT-1080MDA-MB-231细胞在胶原包被的孔内的迁移数量要高于未包被或纤维粘连蛋白包被。能够看到,HT-1080细胞迁移占据了较MDA-MB-231细胞mg娱乐场的中间ROI地区。

3. 结果显示,两种细胞在胶原包被外貌较未包被或纤维粘连蛋白包被外貌迁移更加显著。

    MEK抑制剂U0126对差别外貌包被孔内细胞都体现出了剂量依赖性抑制作用。但是在未包被和纤维粘连蛋白包被孔内的抑制作用更加纷乱。

    同时,ImageXpress Micro在检测进程中能够将检测地区ROI外细胞排除而只检测ROI内迁移细胞,因此检测窗口大,检测灵敏度高。

4. 图表显示,相对付比拟组抑制剂的抑制百分比。U0126对付胶原外貌包被孔内细胞的抑制作用弱于别的外貌包被孔内的细胞。

总结:

HT-1080MDA-MB-231细胞对MEK抑制剂U0126体现出剂量依赖性的抑制作用。

如结果显示,ImageXpress Micro高内涵系统适合于进行细胞迁移的研究,由于能够将ROI地区外细胞排除在外,因此检测窗口大,检测灵敏度高。

Oris细胞迁移板使用方便,易于操作,可用于活细胞或固定细胞(活细胞数据未展示)

来源:美谷分子仪器(上海)有限公司
联系电话:400 820 3586
E-mail:info.china@moldev.com

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