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金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)ELISA检测验剂盒使用说明书
点击次数:2719 公布日期:2018-12-17  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)ELISA检测验剂盒使用说明书
检测原理
试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA)。往预先包被金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标志的检测抗体,通过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处置及保留方法
1.  血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作进程中幸免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞快速小心地离别。
2.  血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.  细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.  组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.  保留:如果样本收集后不敷时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,幸免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
  • 酶标仪(450nm)
  • 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  • 37℃恒温箱
操作注意事项
  1.   试剂盒保留在2-8℃,使用前室温平均20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
  2.   实验中不消的板条应立刻放回自封袋中,密封(低温干燥)保留。
  3.   浓度为0的S0号标准品即可视为阴性比拟或者空缺;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
  4.   严厉按照说明书中标明的时间、加液量及顺次进行温育操作。
  5.   一切液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
名称 96孔配置 48孔配置 备注
微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条
标准品 0.3mL*6管 0.3mL*6管
样本稀释液 6mL 3mL
检测抗体-HRP 10mL 5mL
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL
底物B 6mL 3mL
终止液 6mL 3mL
封板膜 2张 2张
说明书 1份 1份
自封袋 1个 1个
注:标准品(S0-S5)浓度依次为:0、1.25、2.5、5、10、20 ng/mL
试剂的准备
 20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
  1.   手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
  2.   主动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作程序
  1.   从室温平均20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
  2.   设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加差别浓度的标准品50μL;
  3.   样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空缺孔不加。
  4.   除空缺孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标志的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
  5.   弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此反复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波优点测定各孔的OD值。
结果推断
 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
 
试剂盒性能
  •  精确性:标准品线性回归与预期浓度相联系数R值,大于等于0.9900。
  •  灵敏度:最低检测浓度小于0.1 ng/mL。
  •  特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
  •  反复性:板内、板间变异系数均小于15%。
  •  贮藏:2-8℃,避光防潮保留。
  •  有效期:6个月
免责声明
  •   试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所发生的一切后果,由实验者承担,本公司概不认真。
  •   严厉按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
来源:上海一基实业有限公司
联系电话:021-61119791
E-mail:2851717098@qq.com

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