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ACEA Quanteon流式细胞仪在检测循环肿瘤细胞CTCs上的应用
点击次数:1327 公布日期:2019-1-25  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
 
 

循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells, CTCs)是指自发或因诊疗操作自实体肿瘤原发灶或转移灶脱落进入外周血循环的肿瘤细胞,是肿瘤复发和发生远端转移的关键因素。CTCs检测有助于恶性肿瘤的早期诊断、疗效监测、预后推断、耐药性评估等,其临床应用价值已被普遍认可【1,2】由于CTCs的稀有性,流式细胞术鉴定CTCs需有较高灵敏度。

 

 

 

实验设计

 

CTCs在患者血液中的含量非常稀少,大约每106~107个白细胞中仅1个至几个CTCs存在,灵敏度一直是其检测及应用的主要障碍。在众多文献报道中,人们常使用肿瘤细胞掺入实验评价CTCs检测方法/系统的灵敏度、特异性、精确性、反复性等指标。


本研究选用高表示EpCAM的结肠癌细胞株(SW620)作为掺入细胞(图1),第一局部将差别数量(0~256个)SW620细胞掺入到1×106个正常人PBMCs中,用ACEA Quanteon流式细胞仪检测SW620细胞的实际个数,确定仪器检测CTCs的灵敏度。


一、SW620细胞外貌EpCAM表示鉴定

 

图1. SW620细胞外貌EpCAM表示鉴定。将新奇血(2mL)或掺有SW620细胞的新奇血(1000个/2mL)用Ficoll-Paque PLUS淋巴细胞离别液(GE healthcare,17-1440-02)离别PBMCs后,在以上样本以及单独SW620细胞中分别加入抗CD45-FITC和抗EpCAM-APC抗体孵育,设同型抗体比拟,在ACEA Quanteon流式细胞仪上测验,数据采纳相同设门策略分析。a. SW620细胞用IgG1 FITC和IgG2b APC同型抗体染色的结果; b-d. SW620细胞、新奇血和掺有SW620的新奇血用CD45-FITC和EpCAM-APC抗体染色的结果。


二、ACEA Quanteon可检测到106个正常人白细胞中的1个肿瘤细胞

 


 

图2. 灵敏度分析。收集对数生长期的SW620细胞,标志 EpCAM-APC荧光抗体,设同型抗体比拟,冰上孵育60min,用含0.5%BSA的D-PBS洗两遍;将染色后的SW620细胞按0,2,4,8,16,32,64,128,256,512个(体积20μL)分别掺入2×106个PBMCs(体积180μL)中,涡旋混匀(理论上,每100μL中含SW620细胞数:0,1,2,4,8,16,32,64,128,256),在ACEA Quanteon流式细胞仪上中速采集100μL,记载EpCAM+细胞数量。A. 设门策略。FSC-SSC散点图上设P1门去除碎片和杂信号,基于P1门,在散点图上体现为EpCAM+的细胞即为掺入的SW620细胞;B. ACEA Quanteon流式细胞仪上的测验结果;

 

结论
ACEA Quanteon流式细胞仪检测结果显示,在差别细胞数量掺入水平,实际检出细胞数量与理论数量之间呈现良好的线性联系,灵敏度为0.0001%,即可检测到106个正常人白细胞中的1个肿瘤细胞,证明ACEA Quanteon流式细胞仪在检测CTCs方面具有高灵敏度。

参考文献

[1] 循环肿瘤细胞检测与临床应用进展。赵倩雯,司徒博,郑 磊。南方医科大学学报, 2017, 37(10): 1423-1426

[2] 循环肿瘤细胞的研究进展。王宜文,胡孔旺。安徽医科大学学报,2017,52(12):1897-1900

 

*文章来自艾森生物

 

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