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人膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab)酶联免疫检测验剂盒使用说明书
点击次数:2101 公布日期:2019-4-4  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负

人膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab)酶联免疫检测

                     试剂盒使用说明书                                                               AE91118Hu  

使用前细致阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理,来检测人膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab),只能用于研究用途,不得用于医学诊断。

用  途用于人血清、血浆及相关液体样本中膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab)        测定。

工作原理:

本试剂盒采纳的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定样品中人膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab)水平。向预先包被了膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab)克隆抗体的酶标孔中加入膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab),温育;温育后,加入生物素标志的抗ANXA2 AB抗体。再与链霉亲和素-HRP结合,形成免疫复合物,再通过温育和洗涤,去除未结合的酶,然后加入底物A、B,发生蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中膜联蛋白A2抗体(Anxa2 Ab)的浓度呈正相关。

试剂盒组成

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保留

说明书

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1个

1个

 

酶标包被板

1×48

1×96

2-8℃保留

标准品:720μg/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2-8℃保留

标准品稀释液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保留

链霉亲和素-HRP

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保留

生物素标志的抗ANXA2 AB抗体

0.5ml×1瓶

1 ml×1瓶

2-8℃保留

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保留

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保留

终止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

2-8℃保留

浓缩洗涤液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2-8℃保留

 

需要而未提供的试剂和器材:

  1. 37℃恒温箱。
  2. 标准规格酶标仪。
  3. 周密移液器及一次性吸头
  4. 蒸馏水,
  5. 一次性试管
  6. 吸水纸

 

注意事项:

  1. 从2-8℃取出的试剂盒,在开启试剂盒之前要室温平均至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保留。
  2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其精确性,以幸免实验误差
  3. 严厉按照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  4. 为幸免交叉污染,要幸免反复使用手中的吸头和封板膜。
  5. 不消的其它试剂应包装好或盖好。差别批号的试剂不要混用。保质前使用。
  6. 底物B对光敏锐,幸免长时间暴露于光下。

 

洗板方法:

手工洗板方法:甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内,浸泡1-2分钟。依据需要,反复此进程数次。

主动洗板:如果有主动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验进程中

 

标本要求

1.不克检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不克马上进行实验,可将标本放于-20℃保留,但应幸免反复冻融。

 

操作程序:

  1. 标准品的稀释:(本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。)

360μg/L

5号标准品

120μl的原倍标准品加入120μl标准品稀释液

180μg/L

4号标准品

120μl的5号标准品加入120μl标准品稀释液

90μg/L

3号标准品

120μl的4号标准品加入120μl标准品稀释液

45μg/L

2号标准品

120μl的3号标准品加入120μl标准品稀释液

22.5μg/L

1号标准品

120μl的2号标准品加入120μl标准品稀释液

 

  1. 依据代测样品数量加上标准品的数量决议所需的板条数。每个标准品和空缺孔建议做复孔。每个样品依据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
  2. 加样:1)空缺孔,空缺比拟孔不加样品,生物素标志的抗ANXA2 AB抗体,链霉亲和素-HRP,只加显色剂A&B和终止液,别的各步操作相同;2)标准品孔:加入标准品50ul,链霉亲和素-HRP50ul(标准品中已事先整合好生物素抗体,故不加);3)代测样品孔:加入样本40ul,然后各加入抗ANXA2 AB抗体10ul、链霉亲和素-HRP50ul,盖上封板膜,轻轻震荡混匀,37℃温育60分钟。
  3. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此反复5次,拍干。
  5. 显色:每孔先加入显色剂A50ul,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  6. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  7. 测定:以空缺空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后10分钟以内进行。
  8. 依据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程,再依据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也能够使用各种应用软件来计算。

 

操作程序总结:

检测范围:12μg/L -380μg/L

 

保留:2-8℃。

有效期:6个月(2-8℃)。

来源:上海联硕生物科技有限公司
联系电话:15221965586服务电话:400 0918 500
E-mail:lianshuo@vip.126.com

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